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新型式藻類的超聲波萃取方法的優(yōu)化方法
2014-08-08 15:58:56 來源：
超聲波法提取螺旋藻多糖的條件優(yōu)化用正交實驗對提取的影響因素如：時間、pH及溫度進行優(yōu)化。選用正交表L2535，因素-水平設計。
螺旋藻多糖的提取稱取螺旋藻干粉25份，每份質量為10.00g，分別置于25個燒杯經乙醇脫脂后，加200mL的蒸餾水按照正交實驗設計調整pH、溫度，分別在頻率為28HZ的超聲波超聲處理不同的時間，提取液經離心去沉淀，重復兩遍，上清液用三氯乙酸去蛋白，乙醇處理后得沉淀，經干燥處理后得多糖粗品.提取所得的多糖粗品烘干后用硫酸-蒽酮法測定總糖的含量，總糖的含量的計算方法：總糖的含量=溶液中多糖測定濃度/粗提物質量濃度@100%，多糖提取率=粗提物質量/原料質量@100%，多糖提取量=粗提物質量@總糖的含量，考馬斯蘭法測定粗品中的蛋白質含量。
并根據(jù)正交實驗的結果，比較超聲波提取法與常規(guī)水提取法的差異。提取的螺旋藻多糖體外抗腫瘤試驗體外對卵巢癌SKV3細胞生長的影響：取對數(shù)生長期的SKV3細胞，用含10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)液調整細胞濃度為5@103個細胞/mL，鋪在96孔培養(yǎng)板上，1@104個細胞/孔，終體積為200L，l體外培養(yǎng)12h后更換為濃度在10至100ug/mL的螺旋藻多糖培養(yǎng)液，體外培養(yǎng)48h后以MTT法檢測腫瘤細胞抑制率。
抑制率（%）=（對照組平均OD值-實驗組平均OD值）/對照組平均OD值@100%.結果螺旋藻多糖提取量的比較正交實驗結果表明螺旋藻干粉在pH11和60e的水浴條件下用超聲波提取60min得到的螺旋藻多糖的量*多。根據(jù)極差分析結果，影響螺旋藻多糖提出率的3個因素（pH、提取時間、溫度）中，以pH的影響*大，其次是提取的時間和溫度。比較超聲波提取法與水浴提取法在提出率、粗品中的糖含量（結果見所示）。
條件優(yōu)化后超聲波法比單純水體法得提取量顯著提高（P兩種方法提取的螺旋藻多糖的抗腫瘤活性的比較兩種提取方法得到的螺旋藻多糖對SKV3癌細胞株的作用結果表明：兩種提取方法得到的粗提物都能有效的抑制卵巢癌SKV3細胞株的生長（MTT法抑瘤率分別為43.0133.497%和39.26531293），并呈現(xiàn)出良好的量效關系；超聲波法提取的螺旋藻多糖的抑瘤作用高于水浴提取法得到的螺旋藻多糖，但兩者比較沒有顯著性差異（P>0.05）。時間、pH值和溫度三個因素分別對螺旋藻提取量的影響4討論螺旋藻多糖的組成十分復雜，主要由鼠李糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸、木糖、巖藻糖等組成。
目前*常用的糖含量測定方法是蒽酮一硫酸比色法和苯酚-硫酸比色法。但在實際工作中，特別是在測定天然產物中的糖含量時，發(fā)現(xiàn)測得的結果常常與實際情況不符。超聲波法提取螺旋藻多糖時，超聲時間不宜過長，超聲處理60min時提取量達到*大，隨著處理時間的延長，提取率反而下降。
原因可能是由于超聲波具有較強的機械剪切作用，長時間的作用會使大分子的多糖斷裂，從而在后處理的過程中的損失增大而影響多糖的提出率。螺旋藻多糖的提取量過程中，當溫度太高時大分子的多糖局部結構會發(fā)生變化，從而影響提取效果。pH對螺旋藻多糖的提取的影響比較復雜，我們的實驗結果顯示在pH11時得到*大提取量。
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